緩沖液的作用原理(什么叫緩沖溶液?什么是緩沖作用)
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添加時間:2022-11-25 瀏覽次數(shù):1936
PCR是體外合成雙鏈DNA的一種方法,類似于DNA片段復制擴增,其特異性主要來源于特異性引物和特異性DNA聚合酶(Taq酶)。
試劑準備一般為:DNA模板、特異性引物、dNTP、PCR Buffe、Taq酶。按照試劑盒和說明書配制反應體系和設置擴增程序,反應結束電泳鑒定。
實驗室常用的Tris系列緩沖液:三羥甲基氨基甲烷(Tris)是一種應用廣泛的有機物,化學式為C4H11N03,白色結晶顆粒。Tris及其衍生物常用于生化實驗中緩沖液的制備,尤其是核酸和蛋白質相關的實驗中都需要用到它作為生物緩沖劑。作為弱堿性的緩沖試劑在配制大范圍PH值的緩沖液中有很大的優(yōu)勢,并且不與Ca、Mg離子等重金屬離子反應發(fā)生沉淀,對實驗結果的干擾很小。
Tris系列緩沖液包括:TBS緩沖液、TBST緩沖液、TE緩沖液、TAE緩沖液、TBE緩沖液。今天主要介紹TE緩沖液和TAE緩沖液。
TE緩沖液:是Tris-HCL緩沖液+EDTA,一般用作溶解劑或保持劑,對DNA的堿基有保護作用,被用于DNA的穩(wěn)定和儲存。
TAE緩沖液:是使用最廣泛的緩沖液系統(tǒng),雙鏈DNA在其中的遷移率較快,回收DNA片段時經常用TAE系統(tǒng)進行電泳。
常規(guī)的TAE緩沖試劑一般為瓶裝的50×TAE濃縮液,每次使用時需要配成1×的來使用,而且運輸途中保存較困難,影響液體的穩(wěn)定性。
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